Экспресс-тест РЭД Эшерихия коли штамм O157:H7 предназначен для in vitro одноэтапного быстрого качественного выявления Escherichia coli O157:H7. Может использоваться в домашних условиях. В качестве образцов для анализа используется кал. В наборе 10 тестов.
Escherichia coli O157:H7 является одной из самых распространенных причин бактериальной диареи. Передается, главным образом, через продукты питания, не прошедшие достаточную тепловую обработку (мясо, молочные продукты, сырые фрукты и овощи, загрязненная вода), а также при контакте с зараженными людьми. Основные симптомы заражения Escherichia coli O157:H7 – геморрагическая диарея, приступообразные острые рези в животе. Оптимальный период для проведения диагностики – первые 7 дней после появления симптомов, т.к. в это время наблюдается наибольшая концентрация бактерий в кале.
Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце клеток Escherichia coli O157:H7 они вступают в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против Escherichia coli O157:H7, меченными окрашенными частицами, и продолжают движение с током жидкости. В аналитической зоне тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенного иммунного комплекса.
В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале клеток Escherichia coli O157:H7. В том случае, если в анализируемом образце присутствуют клетки Escherichia coli O157:H7, на тест-полоске образуются две параллельные линии (красная аналитическая, обозначенная буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа. В случае отсутствия в анализируемом образце клеток Escherichia coli O157:H7 на тест-полоске образуется одна зеленая контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа.
Один комплект тестов «РЭД Escherichia coli» включает:
Кассеты с тест-полосками упакованы в индивидуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силикагелем.
Комплект тестов «РЭД Escherichia coli» упакован в картонную коробку.
Свежесобранный биологический материал (кал), не содержащий консерванты.
Образцы кала должны быть собраны в чистый контейнер. Следует отбирать образцы кала для анализа в течение первой недели после появления симптомов, т.к. в это время наблюдается наибольшая концентрация бактерий Escherichia coli O157:H7 в кале.
Образцы кала до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 2 сут., при необходимости более длительного (до 1 года) хранения – при температуре –20°С и ниже.
Перед анализом образцы кала должны быть полностью разморожены и доведены до комнатной температуры.
Повторное замораживание и оттаивание образцов недопустимо.
1. Снять крышку-капельницу с пробирки и с помощью стержня на крышке взять небольшое количество анализируемого образца. Для этого ввести стержень в 3 разные зоны образца, собрав примерно 100 мг кала (рис. 1-1). Если образец жидкий, отобрать 100 мкл с помощью пипетки. Ввести стержень с образцом в пробирку с буфером для растворения образца и плотно завинтить крышкукапельницу (рис. 1-2).
2. Несколько раз встряхнуть пробирку, чтобы облегчить растворение образца (рис. 2-1).
Анализируемые образцы кала и тесты «РЭД Escherichia coli» перед проведением анализа должны быть доведены до комнатной температуры (15–25°С).
3. Встряхнуть пробирку с раствором образца (рис. 2-1). Отрезать или отломить кончик крышки-капельницы.
4. Непосредственно перед началом анализа вскрыть упаковку теста «РЭД Escherichia coli», разрывая ее вдоль прорези. Извлечь кассету с тест-полоской и положить ее на ровную горизонтальную поверхность.
5. 4 капли (примерно 100 мкл) жидкого образца внести в круглое окошко кассеты, обозначенное буквой S, избегая попадания твердых частиц образца вместе с жидкостью (рис. 2-2). Для каждого образца или контроля необходимо использовать отдельную пробирку с буфером для растворения образца и отдельный тест «РЭД Escherichia coli».
6. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.
Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце кала клеток Escherichia coli O157:H7 (рис. 3-1).
Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных линий (С и Т) свидетельствует о положительном результате анализа, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце кала клеток Escherichia coli O157:H7 (рис. 3-2). Интенсивность красной аналитической линии (Т) в тестовом окошке кассеты может меняться в зависимости от концентрации клеток Escherichia coli O157:H7 в образце.
В тех случаях, когда в тестовом окошке кассеты не образуется ни одной окрашенной линии или образуется только красная аналитическая линия (Т), результат анализа признается недействительным (рис. 3-3). При этом анализ следует повторить с использованием другого теста «РЭД Escherichia coli».
Избыточное количество образца кала может привести к появлению в тестовом окошке кассеты нечетких линий темного цвета, которые не имеют диагностического значения. В этом случае следует добавить в образец кала бoльшее количество растворителя и повторить анализ с использование другого теста «РЭД Escherichia coli».
Результаты, полученные с использованием теста «РЭД Escherichia coli», являются предварительными. Для их подтверждения необходимо проведение дополнительных исследований образцов кала с использованием альтернативных методов.