Экспресс-тест РЭД Сальмонелла предназначен для in vitro одноэтапного быстрого качественного выявления Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium (Salmonella spp.). Может использоваться в домашних условиях. В качестве образцов для анализа используется кал. В наборе 10 тестов.
Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium являются возбудителями кишечного заболевания сальмонеллеза. Источниками заражения являются инфицированные куриное мясо, яйца и молочные продукты, не прошедшие достаточную тепловую обработку. Сальмонеллез легко может передаваться через овощи, фрукты или другие продукты питания при их контакте с зараженными руками, посудой, ножами, рабочими поверхностями. Симптомы заболевания проявляются через 12-72 часа после инфицирования. Инкубационный период продолжается до 7 дней. У заболевших сальмонеллезом появляются боли в области живота, расстройство стула, высокая температура, головная боль, тошнота, рвота, и, как осложнение, реактивный артрит. Сальмонеллез особенно опасен для пожилых людей, людей с ослабленной иммунной системой, детей.
Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце клеток Salmonella enteritidis или Salmonella typhimurium они вступают в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против Salmonella, меченными окрашенными частицами, и продолжают движение с током жидкости. В аналитической зоне тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенного иммунного комплекса. В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале клеток Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium.
В том случае, если в анализируемом образце присутствуют клетки Salmonella enteritidis или Salmonella typhimurium, на тест-полоске образуются две параллельные окрашенные линии (красная аналитическая, обозначенная буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа. В случае отсутствия в анализируемом образце клеток Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium на тест-полоске образуется одна зеленая контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа.
Один комплект тестов «РЭД Salmonella» включает:
Свежесобранный биологический материал (кал), не содержащий консерванты.
Образцы кала должны быть собраны в чистый контейнер.
Образцы кала до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 2 сут., при необходимости более длительного (до 1 года) хранения – при температуре –20°С и ниже.
Перед анализом образцы кала должны быть полностью разморожены и доведены до комнатной температуры. Повторное замораживание и оттаивание образцов недопустимо.
1. Снять крышку-капельницу с пробирки и с помощью стержня на крышке взять небольшое количество анализируемого образца. Для этого ввести стержень в 3 разные зоны образца, собрав примерно 150 мг кала (рис. 1-1). Если образец жидкий, отобрать 150 мкл с помощью пипетки. Ввести стержень с образцом в пробирку с буфером для растворения образца и плотно завинтить крышку-капельницу (рис. 1-2). 2. Несколько раз встряхнуть пробирку, чтобы облегчить растворение образца (рис. 2-1).
Анализируемые образцы кала и тесты «РЭД Salmonella» перед проведением анализа должны быть доведены до комнатной температуры (15–25°С). 3. Встряхнуть пробирку с раствором образца (рис. 2-1). Отрезать или отломить кончик крышки-капельницы. 4. Непосредственно перед началом анализа вскрыть упаковку теста «РЭД Salmonella», разрывая ее вдоль прорези. Извлечь кассету с тест-полоской и положить ее на ровную горизонтальную поверхность.
5. 4 капли (примерно 100 мкл) жидкого образца внести в круглое окошко кассеты, обозначенное буквой S, избегая попадания твердых частиц образца вместе с жидкостью (рис. 2-2). Для каждого образца или контроля необходимо использовать отдельную пробирку с буфером для растворения образца и отдельный тест «РЭД Salmonella».
6. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.
Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце кала клеток Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium (рис. 3-1).
Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (С и Т) свидетельствует о положительном результате анализа, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце кала клеток Salmonella enteritidis или Salmonella typhimurium (рис. 3-2).
Интенсивность красной аналитической линии (Т) в тестовом окошке кассеты может меняться в зависимости от концентрации клеток Salmonella в образце. В тех случаях, когда в тестовом окошке кассеты не образуется ни одной окрашенной линии или образуется только красная аналитическая линия (Т), результат анализа признается недействительным (рис. 3-3). При этом анализ следует повторить с использованием другого теста «РЭД Salmonella».
Избыточное количество образца кала может привести к появлению в тестовом окошке кассеты нечетких линий темного цвета, которые не имеют диагностического значения. В этом случае следует добавить в образец кала бoльшее количество растворителя и повторить анализ с использование другого теста «РЭД Salmonella». Результаты, полученные с использованием теста «РЭД Salmonella», являются предварительными. Для их подтверждения необходимо проведение дополнительных исследований образцов кала с использованием альтернативных методов.